פּראָדוקטן
לייפקאָסם SARS-Cov-2-RT-PCR דעטעקציע קיט פֿאַר 2019-nCoV
ערוואַרטע באַניץ
די קיט ווערט גענוצט פאר דער קוואליטאטיווער דעטעקציע פון נייעם קאראנאוויירוס (2019-nCoV) ניצנדיק האַלדז-שטויסן, נאַזאָפאַרינגעאַלע שויסן, בראָנטשאָאַלוועאָלאַרע לאַוואַזש פליסיקייט, שפּייַעכץ. די דעטעקציע רעזולטאַטן פון דעם פּראָדוקט זענען בלויז פֿאַר קלינישע רעפֿערענץ, און עס זאָל נישט ווערן גענוצט ווי דער איינציקער באַווייַז פֿאַר קלינישער דיאַגנאָז און באַהאַנדלונג. א פולשטענדיקע אַנאַליז פון דעם צושטאַנד איז רעקאָמענדירט אין קאָמבינאַציע מיט די פּאַציענט'ס קלינישע מאַניפעסטאַציעס און אַנדערע לאַבאָראַטאָריע טעסץ.
דורכקוק פּרינציפּ
דער קיט איז באזירט אויף איין-סטעפּ RT-PCR טעכנאָלאָגיע. אין פאַקט, די 2019 נייַ קאָראָנאַווירוס (2019-nCoV) ORF1ab און N גענעס זענען אויסגעקליבן ווי די אַמפּליפיקאַציע ציל געביטן. ספּעציפֿישע פּריימערס און פלורעסענט פּראָובז (N גענע פּראָובז זענען לייבאַלד מיט FAM און ORF1ab פּראָובז זענען לייבאַלד מיט HEX) זענען דיזיינד צו דעטעקטירן 2019 נייַ-טיפּ קאָראָנאַווירוס RNA אין סאַמפּאַלז. דער קיט אויך כולל אַן ענדאָגענאָוס ינערלעך קאָנטראָל דעטעקשאַן סיסטעם (ינערלעך קאָנטראָל גענע פּראָוב לייבאַלד מיט CY5) צו מאָניטאָר דעם פּראָצעס פון סאַמפּאַל זאַמלונג, RNA און PCR אַמפּליפיקאַציע, דערמיט רידוסינג פאַלש נעגאַטיוו רעזולטאַטן.
הויפּט קאָמפּאָנענטן
| קאָמפּאָנענטן | באַנד(48T/קיט） |
| RT-PCR רעאַקציע לייזונג | 96µl |
| nCOV אָנפאַנגער TaqMan פּראָבעמיקסטשער (ORF1ab, N Gene, RnaseP Gene) | 864µl |
| נעגאַטיווע קאָנטראָל | 1500µl |
| nCOV positive קאָנטראָל（ל ORF1ab N Gene) | 1500µl |
אייגענע רעאַגענטן: RNA עקסטראַקציע אָדער רייניקונג רעאַגענטן. נעגאַטיוו/פּאָזיטיוו קאָנטראָל: די פּאָזיטיוו קאָנטראָל איז RNA וואָס כּולל דעם ציל פראַגמענט, בשעת די נעגאַטיוו קאָנטראָל איז נוקלעיק זויער-פֿרייַ וואַסער. בעת נוצן, זאָלן זיי אָנטייל נעמען אין דער עקסטראַקציע און זאָלן באַטראַכט ווערן ווי ינפעקטיאָוס. זיי זאָלן באַהאַנדלט און באַזייַטיקט ווערן לויט די באַטייַטיקע רעגולאַציעס.
דער אינערלעכער רעפערענץ גען איז דער מענטשלעכער RnaseP גען.
סטאָרידזש באדינגונגען און עקספּיראַציע דאַטע
-20±5℃, פֿאַרמײַדן איבערגעחזרטע פֿאַרפֿרירונג און אויפֿטאָען מער ווי 5 מאָל, גילטיק פֿאַר 6 חדשים.
אָנווענדלעך אינסטרומענט
מיט FAM / HEX / CY5 און אנדערע מולטי-קאַנאַל פלורעסענט PCR אינסטרומענטן.
מוסטער רעקווייערמענץ
1. אָנווענדלעך ספּעסאַמאַן טייפּס: האַלדז סוואַבס, נאַזאָפאַרינגעאַל סוואַבס, בראָנטשאָאַלוועאָלאַר לאַוואַדזש פליסיק, שפּייַעכץ.
2. מוסטער זאַמלונג (אַסטעפּטישע טעכניק)
פאַרינגעאַל שוואָם: ווישט די מאַנדלען און די הינטערשטע פאַרינגעאַל וואַנט מיט צוויי שוואָמען אין דער זעלבער צייט, און דערנאָך טונקט דעם שוואָם קאָפּ אין אַ טעסט רער מיט די סאַמפּלינג לייזונג.
שפּייַעכץ: נאָכדעם וואָס דער פּאַציענט האָט אַ טיפן הוסט, זאָל מען זאַמלען דעם אויסגעהויסטענעם שפּייַעכץ אין אַ טעסט־רער מיט אַ שרויף־דעקל וואָס ענטהאַלט די מוסטער־לייזונג; בראָנטשאָאַלוועאָלאַרע לאַוואַזש־פליסיקייט: מוסטערן זאָלן גענומען ווערן דורך מעדיצינישע פּראָפעסיאָנאַלן. 3. אויפֿבעוואַרעניש און טראַנספּאָרטאַציע פֿון מוסטערן
ספּעסאַמענס פֿאַר ווירוס איזאָלאַציע און RNA טעסטינג זאָלן געטעסט ווערן אַזוי שנעל ווי מעגלעך. ספּעסאַמענס וואָס קענען דעטעקטירט ווערן אין 24 שעה קענען געהאַלטן ווערן ביי 4℃; די וואָס קענען נישט דעטעקטירט ווערן אין 24
שעה זאָלן זיין געהאַלטן ביי -70℃ אדער נידעריגער (אויב עס איז נישטאָ קיין סטאָרידזש צושטאַנד פון -70℃, זאָלן זיי זיין
צייטווייליק געהאלטן ביי -20℃ קילער). ספּעסאַמאַנז זאָלן ויסמיידן ריפּיטידלי פרירן און אויפֿטאָען בעשאַס טראַנספּאָרט. ספּעסאַמאַנז זאָלן געשיקט ווערן צו לאַבאָראַטאָריע ווי באַלד ווי מעגלעך נאָך זאַמלונג. אויב מוסטערן דאַרפֿן טראַנספּאָרטירט ווערן איבער לאַנגע דיסטאַנצן, איז רעקאָמענדירט טרוקן אייז סטאָרידזש.
טעסט מעטאָדן
1 מוסטער פּראַסעסינג און רנאַ עקסטראַקציע (מוסטער פּראַסעסינג געגנט)
עס איז רעקאָמענדירט צו נעמען 200μl פון פליסיקן מוסטער פאר RNA עקסטראַקציע. פֿאַר פֿאַרבונדענע עקסטראַקציע טריט, זעט די אינסטרוקציעס פון קאמערציעלע RNA עקסטראַקציע קיץ. ביידע די נעגאַטיווע און נעגאַטיווע
קאָנטראָלס אין דעם קיט זענען געווען ינוואַלווד אין די עקסטראַקציע.
2 PCR רעאַגענט צוגרייטונג (רעאַגענט צוגרייטונג געגנט)
2.1 אַרויסנעמען אַלע קאָמפּאָנענטן פֿון דעם קיט און אויפֿטאָען און מישן ביי צימער טעמפּעראַטור. צענטריפוגירן ביי 8,000 רפּם פֿאַר אַ פּאָר סעקונדעס איידער נוצן; רעכענען אויס די נויטיקע מאָס רעאַגענטן, און די רעאַקציע סיסטעם ווערט צוגעגרייט ווי געוויזן אין דער פֿאָלגנדיקער טאַבעלע:
| קאָמפּאָנענטן | N סערווינג (25µl סיסטעם) |
| nCOV אָנפאַנגער TaqMan פּראָבעמיקסטשער | 18 µl × N |
| RT-PCR רעאַקציע לייזונג | 2 µl × N |
| *N = צאָל פון געטעסטע מוסטערן + 1 (נעגאַטיווע קאָנטראָל) + 1 (nCOVפּאָזיטיווע קאָנטראָל) | |
2.2 נאכדעם וואס איר האט גוט געמישט די קאמפאנענטן, צענטריפוגירט פאר א קורצע צייט כדי צו לאזן אלע פליסיקייט אויף דער רער וואנט פאלן צום דנאָ פון דער רער, און דערנאך טיילט אריין די 20 µl אמפליפיקאציע סיסטעם אין דער PCR רער.
3 מוסטערונג (ספּעסאַמאַן צוגרייטונג געגנט)
לייגט צו 5μl פון די נעגאַטיווע און פּאָזיטיווע קאָנטראָלן נאָך עקסטראַקציע. די RNA פון דעם מוסטער וואָס מען דאַרף טעסטן ווערט צוגעגעבן צום PCR רעאַקציע רער.
מאַכט אַ גוטן דעקל אויף דעם רער און צענטריפוגירט ביי 8,000 רפּם פֿאַר אַ פּאָר סעקונדעס איידער איר טראַנספערירט עס צו דער אַמפּליפיקאַציע דעטעקשאַן געגנט.
4 PCR אַמפּליפיקאַציע (אַמפּליפיצירטע דעטעקציע געגנט)
4.1 שטעלט אריין די רעאקציע רער אין דער מוסטער צעל פון דעם אינסטרומענט, און שטעלט איין די פאראמעטערס ווי פאלגנד:
| בינע | ציקל נומער | טעמפּעראַטור(°C) | צייט | זאַמלונגפּלאַץ |
| פאַרקערטטראַנסקריפּציע | 1 | 42 | 10 מינוט | - |
| פאַר-דענאַטוראַציעn | 1 | 95 | 1 מינוט | - |
| ציקל | 45 | 95 | 15ס | - |
| 60 | 30ער יאָרן | דאַטן זאַמלונג |
אויסוואל פון אינסטרומענט דעטעקציע קאנאל: אויסקלייבן דעם FAM, HEX, CY5 קאנאל פארן פלורעסצענץ סיגנאל. פאר רעפערענץ פלורעסצענט NONE, ביטע אויסקלייבן נישט ROX.
5 רעזולטאַט אַנאַליז (ביטע זען די עקספּערימענטאַלע אינסטרוקציעס פון יעדן קיילע פֿאַר סעטטינג)
נאך דער רעאקציע, ראטעוועט די רעזולטאטן. נאך דער אנאליז, שטעלט איין דעם אנפאנגס ווערט, ענדע ווערט, און שוועל ווערט פון דער באזע-ליניע לויטן בילד (דער באניצער קען שטעלן איין לויט דער אמת'ער סיטואציע, דער אנפאנגס ווערט קען ווערן געשטעלט צו 3~15, דער ענדע ווערט קען ווערן געשטעלט צו 5~20, אַדזשאַסטמענט) אין דער לאגאריטמישער גראף. ביים שוועל פון פענצטער, איז די שוועל ליניע אין דער לאגאריטמישער פאזע, און די פארשטארקונג קורווע פון דער נעגאטיווער קאנטראל איז א גלייכע ליניע אדער אונטער דער שוועל ליניע).
6 קוואַליטעט קאָנטראָל (אַ פּראָצעדוראַלע קאָנטראָל איז אַרייַנגערעכנט אין דעם טעסט) נעגאַטיווע קאָנטראָל: קיין קלאָרע אַמפּליפיקאַציע קורווע פֿאַר FAM, HEX, CY5 דעטעקציע קאַנאַלן
COV פּאָזיטיווע קאָנטראָל: קלאָרע אַמפּליפיקאַציע קורווע פון FAM און HEX דעטעקציע קאַנאַלן, Ct ווערט ≤32, אָבער קיין אַמפּליפיקאַציע קורווע פון CY5 קאַנאַל;
די אויבנדערמאנטע באדערפענישן מוזן זיין דערפילט גלײַכצײַטיק אין דעם זעלבן עקספּערימענט; אַנדערש איז דער עקספּערימענט אומגילטיק און דאַרף ווערן איבערגעחזרט.
7 באַשטימונג פון רעזולטאַטן.
7.1 אויב עס איז נישטאָ קיין אַמפּליפיקאַציע קורווע אדער Ct ווערט> 40 אין די FAM און HEX קאַנאַלן פון די טעסט מוסטער, און עס איז דאָ אַן אַמפּליפיקאַציע קורווע אין די CY5 קאַנאַל, קען מען משפּטן אַז עס איז נישטאָ קיין 2019 נייַ קאָראָנאַווירוס (2019-nCoV) RNA אין די מוסטער;
.2 אויב די טעסט מוסטער האט קלארע פארגרעסערונג קורוועס אין די FAM און HEX קאנאלן, און די Ct ווערט איז ≤40, קען מען באורטיילן אז די מוסטער איז פאזיטיוו פארן 2019 נייעם קאראנאוויירוס (2019-nCoV).
7.3 אויב די טעסט מוסטער האט א קלארע פארגרעסערונג קורווע נאר אין איין קאנאל פון FAM אדער HEX, און די Ct ווערט איז ≤40, און עס איז נישטא קיין פארגרעסערונג קורווע אין די אנדערע קאנאל, דארפן די רעזולטאטן ווערן איבערגעטעסט. אויב די איבערגעטעסט רעזולטאטן זענען קאנסיסטענט, קען מען באורטיילן די מוסטער אלס פאזיטיוו פאר די נייע.
קאראנאוויירוס 2019 (2019-nCoV). אויב דער רעזולטאט פון דעם ווידער-טעסט איז נעגאטיוו, קען מען באורטיילן אז דער מוסטער איז נעגאטיוו פארן 2019 נייעם קאראנאוויירוס (2019-nCoV).
פּאָזיטיווער משפט ווערט
די ROC קורווע מעטאָדע ווערט גענוצט צו באַשטימען די רעפערענץ CT ווערט פון דעם קיט און די אינערלעכע קאָנטראָל רעפערענץ ווערט זענען 40.
אויסטײַטשונג פון טעסט רעזולטאַטן
1. יעדער עקספּערימענט זאָל געטעסט ווערן אויף נעגאַטיווע און פּאָזיטיווע קאָנטראָלן. טעסט רעזולטאַטן קענען נאָר באַשטימט ווערן ווען די קאָנטראָלן טרעפן די קוואַליטעט קאָנטראָל רעקווייערמענץ.
2. ווען די FAM און HEX דעטעקציע קאנאלן זענען פאזיטיוו, קען דער רעזולטאט פון די CY5 קאנאל (אינערלעכער קאנטראל קאנאל) זיין נעגאטיוו צוליב סיסטעם קאנקורענץ.
3. ווען דער אינערלעכער קאנטראל רעזולטאט איז נעגאטיוו, אויב די טעסט רער'ס FAM און HEX דעטעקציע קאנאלן זענען אויך נעגאטיוו, מיינט דאס אז די סיסטעם איז אפגעשטעלט אדער די אפעראציע איז נישט ריכטיג, דער טעסט איז נישט גילטיק. דעריבער, דארפן די סעמפלען ווערן איבערגעטעסט.
